1.原理 细胞增殖法通常适用于促进细胞增殖的细胞因子的检测,如IL-1、IL-2、IL-7、IL-9、IL-11、IL-12、SCF的检测。CSF类的因子主要采用集落形成试验,其本质也是细胞增殖试验。目前已建立的应用依赖细胞株检测各种细胞因子的方法,其操作过程大同小异。检测细胞因子促增殖活性是将不同浓度的细胞因子待检标本和标准品与指示细胞株共同孵育一定时间,再检测增殖的细胞情况,细胞的增殖程度与细胞因子的活性成正比。常用方法有3H-TdR掺入法、比色法、染色法和直接计数法等。其中比色法,可在全自动酶标检测仪上检测,且无同位素污染,较为常用,但敏感性不如同位素掺入技术。
2.方法 现IL-2的检测方法(IL-2依赖株细胞增殖法)检测IL-2为例作简要介绍: IL-2主要由活化的T细胞产生,通过自分泌和旁分泌作用于自身或邻近的T细胞,是机体细胞因子网络中最重要的调节者。因此,IL-2活性的检测已成为评价机体免疫功能的重要指标之一。
目前常用的 IL-2检测指示细胞有:①IL-2依赖细胞株,如CTB6、F12、CTLL-2。②丝裂原活化的T淋巴细胞。③小鼠胸腺细胞。依赖细胞具有较强的特异性,为最常用的指示细胞。
首先收集处于对数生长期的CTLL-2细胞,将饲养CTLL-2培养液中的IL-2洗除,用无IL-2的完全培养基将CTLL-2细胞调整到合适浓度。将一定量合适浓度的CTLL-2细胞和不同稀释度IL-2待检标本分别加入96孔平底培养板中,置细胞培养箱中培养一定时间。细胞的增值情况采用3H-TdR掺入法,用β-液体闪烁仪测定CTLL-2细胞在IL-2作用下所掺入3H-TdR量(cpm值)。实验过程中设阴性对照、培养液对照及不同稀释度IL-2标准品对照。根据公式确定待检标本所含的IL-2的生物学活性。
50%最大增殖3 H-TdR掺入值的标本稀释度
本方法的特异性受依赖细胞依赖程度的影响,长期培养的细胞对IL-2的依赖程度可能发生改变,因此,在细胞传代的过程中应防止细胞发生突变,如发生突变应及早进行克隆化。
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