许多细胞因子针对转化的细胞及病毒感染的细胞具有溶细胞或抑制细胞生长的活性。检测细胞因子细胞毒或抑制生长活性方法学与增殖法相似，只是细胞因子的作用结果不同。本法常用于肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)的测定。TNF-α和TNF-β均能与相同的受体结合，它们的生物学活性相似。TNF可对一些肿瘤细胞或细胞系具有细胞毒活性。最常用的靶细胞为小鼠成纤维细胞株L929、WEHI164.13。细胞死亡率与TNF活性成正比，TNF-α与TNF-β可用特异性中和抗体来区别。检测细胞毒活性可用同位素51Cr释放法、MTT比色法和染料染色方法，下面介绍MTT比色法。

　　利用染料MTT可使活细胞通过代谢产生紫兰色的沉淀物，经二甲亚砜（DMSO）或3%的酸化异丙醇溶解，通过测定其OD值来反映细胞的死亡和存活比例，从而反映TNF的生物学活性。

　　L929细胞为贴壁细胞，用胰蛋白酶消化收集对数生长期的L929细胞，用培养液调将细胞调整到合适浓度。将一定量合适浓度的L929细胞和不同稀释度TNF待检标本分别加入96孔平底培养板中，置细胞培养箱中培养一定时间。培养终止前4-6小时，掺入MTT，加入DMSO溶解MTT代谢后的蓝色沉淀物，用酶标仪以570nm为测定波长，630nm为参考波长测定OD值。实验过程中设阴性对照、培养液对照及不同稀释度TNF标准品对照。在正态概率纸上作图，以细胞死亡率为纵座标，以TNF标准品为横座标绘制标准曲线,根据导致50％细胞死亡的TNF待检和标准样品所对应的稀释度,按下式计算TNF的活性单位：

L929细胞不宜生长过密，刚好长成单细胞层即可。TNF的细胞毒作用在有转录抑制剂放线菌素D存在时，其敏感性可提10～100倍。但是L929细胞随着传代或受其他因素的影响，对放线菌素D的敏感性会有差异，因此要通过预试来确定其使用浓度。代谢产物的色深浅不但与活细胞的多少有关，而且也与细胞的激活有关，因MTT被活细胞摄取后，在线粒体脱氢酶的作用下，还原成深蓝色的物质。如细胞被某种因素激活后，其代谢加强，线粒体脱氢酶活性亦增强，着色也加深。故用MTT染色时，必须考虑待检标本中是否含有能激活靶细胞的因素，否则会干扰结果的判断。