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  此方法主要用于IFN的检测。IFN可诱导细胞产生抑制病毒RNA和DNA合成的酶,保护细胞不受病毒感染,产生细胞病变效应。常用于检测抗病毒活性的细胞株有Wish、Hep2/c、L929、A549和MDBK等。其中Wish和Hep2/c细胞株用以检测人干扰素,L929细胞株用于检测小鼠干扰素,Ratec细胞株用于检测大鼠干扰素,而MDBK细胞株则用于检测多种属的IFN-α和IFN-γ。常用于攻击细胞的病毒有滤泡性口炎病毒(VSV)、鼠脑心肌炎病毒(EMCV)以及Sindbis virus等病毒。通过检测细胞病变效应(CPE)、病毒蚀斑形成或病毒的产量被抑制程度,间接反映IFN的生物学活性。最为常用的是细胞病变抑制法(cytopathic effect inhibition,CPEI),IFN抗病毒活性单位的定义是指能抑制50%细胞病变或50%病毒空斑形成效应的IFN最高稀释度的倒数。最常用的体系是Wish细胞(人羊膜传代细胞株)-VSV(滤泡性口炎病毒)。

  用胰蛋白酶消化、收集对数生长期的Wish细胞,用培养液调将细胞调整到合适浓度,将一定量合适浓度的Wish细胞接种于96孔板内,培养一定时间使其生长成单层细胞。加入不同稀释度IFN待检标本,培养过夜,然后再倾去上清夜,用100 TCID50的VSV攻击,继续培养1-2天。当病毒对照孔细胞刚好全部或75%以上出现明显病变时,在倒置显微镜下观察结果或用结晶紫将细胞染色后,在显微镜下用肉眼观察结果,估计病变程度。试验过程中要设立IFN标准品对照、空白(细胞)对照、阴性对照、病毒对照。

  细胞病变分为5个等级:"0"无明显细胞病变;"1+"病变≤25%;"2+"病变为25~50%;"3+"病变为50~75%;"4+"病变为75~100%。

  统计按上述标准判断不同稀释度IFN检品对细胞病变的抑制程度,然后计算效价及IFN国际单位

  

  本方法操作复杂,影响因素较多,在试验前应对所用的病毒进行滴定。计算病毒所致的细胞病变效应程度较为粗糙。该测定方法通常用于IFN-α效价的测定,但也适用于IFN-γ抗病毒活性的测定。本试验也可采用MTT法进行测定。此外IFN-γ的测定也可用MHC-Ⅱ类抗原诱导法,在此不作介绍。