某些细胞因子可刺激特定细胞产生生物活性物质,通过测定所诱生产物,反映细胞因子活性。如,IL-1可诱导胸腺细胞分泌IL-2,IL-2的水平可间接反映IL-1的活性。
例:小鼠胸腺细胞增殖法检测IL-1的生物活性。 IL-1可协同有丝分裂原(ConA或PHA)刺激T细胞或胸腺细胞发生增殖反应,同时IL-1可刺激T细胞产生细胞因子(如IL-2),促进胸腺细胞增殖。测定细胞增殖程度可检测IL-1的生物活性。
首先制备BABL/c小鼠胸腺单细胞悬液,再用胸腺细胞增殖法滴定ConA(或PHA),以确定ConA(或PHA)亚刺激剂量。其次,将一定量合适浓度的胸腺细胞、亚刺激剂量ConA(或PHA)和不同稀释度IL-1待检标本分别加入96孔平底培养板中,置细胞培养箱中培养一定时间。最后,采用3H-TdR掺入法(和MTT比色法测定细胞增值程度。实验过程中设阴性对照、培养液对照及有丝分裂原对照和不同稀释度IL-1标准品对照。根据IL-1标准品的生物学活性与掺入的3H-TdR量绘制标准曲线确定标本中IL-1含量,然后确定待检标本所含的IL-1的生物学活性。
此法是目前测定IL-1最常用而简便的方法,其敏感度为10~50pg/ml。但缺乏特异性,因IL-2也可促进亚活化的胸腺细胞增殖,标本中T细胞增殖或抑制因子可干扰结果,最好用IL-1抗体作阻断试验。采用MTT比色法代替3H-TdR掺入法,可避免3H-TdR造成的环境污染,但灵敏度较低。
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