常用的方法有Northern印迹、斑点印迹、RT-PCR、原位杂交、原位PCR、RNA半寿期的检测和进行中的转录分析(run
on assay)等。
1.Northern印迹杂交
方法学与Southern印迹相似,只是将检测的对象由DNA换成RNA。本方法有一定的限制性,因为mRNA的稳定性及其降解速率直接影响细胞内mRNA的积累量,因此用细胞总RNA作Northern印迹杂交,其结果不能完全反映mRNA的转录活性。
2.反转录PCR(RT-PCR)
细胞因子的mRNA寿命短、拷贝数低,难以在小量样本中进行检测。RT-PCR能检测细胞内低丰度特异mRNA的方法。首先以总RNA为模板,在逆转录酶的催化下,合成与RNA互补的cDNA,然后以cDNA为模板,用PCR技术对靶序列进行扩增,使微量细胞因子的mRNA经放大后检出。
目前最为先进的基因芯片(chip)技术也可以用于细胞因子的DNA或RNA的检测。
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