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沉淀反应>> 凝胶内沉淀试验 |
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凝胶内沉淀试验(gel
phase precipitaton)主要是指琼脂糖扩散或称凝胶扩散(gel diffusion)。常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶。根据抗原与抗体反应的方式和特性,可将凝胶内沉淀试验分为:①单相琼脂扩散试验;②双相琼脂扩散试验。
1.单相琼脂扩散试验
1)原理
将定量抗体混匀在琼脂凝胶中,继加待测的抗原溶液使其单独在凝胶中扩散,在抗原抗体相遇比例合适的部位,两者结合形成沉淀环,沉淀环大小与抗原的浓度成正相关。
2)技术要点
将抗体和0.9%琼脂糖50-56℃混合,即刻倾注成平板。待凝固后在琼脂板上打孔,孔中加入已稀释的抗原液和不同浓度的抗原标准品,37℃,24-48小时,让其自由扩散,孔周围出现沉淀环,沉淀环的直径与待测标本内含量相关。
2.双相琼脂扩散试验
1)原理
将抗原和抗体溶液分别放在凝胶不同的对应孔中,让两者均在凝胶中自由扩散,当抗原与抗体相遇,在比例合适时形成可见的白色沉淀线。
2)技术要点 先在平板玻璃上倾注一均匀的凝胶薄层,打制2~3mm的小孔,分别加入抗原或抗体。温育1~2天,可出现不同沉淀线。
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