为获得好的免疫效果,抗原纯化后应进行鉴定才能用于动物免疫,抗原的鉴定主要包括以下几个方面:
1.含量检测 蛋白含量的测定最准确的方法是凯氏定氮法,但由于要求有精密设备,故不适合一般实验室。一般实验室均采用分光光度计测量法。该法首先测定280nm和260nm的吸光度(A),再用经验公式计算蛋白含量。
蛋白含量(mg/ml)=A280×1.45-A260×0.74。
另外蛋白含量也可采用福林酚法,具体操作见临床生化技术。
2.分子量的鉴定 测定分子量一般采用SDS-PAGE电泳法,详见临床生化技术。
3.纯度鉴定 常采用区带电泳法鉴定,详见临床生化技术。
4.免疫活性鉴定 常采用双向琼脂扩散试验。
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