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免疫血清的制备与鉴定>> 确定免疫方案 |
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根据抗原的性质和选择的动物情况，制定免疫方案。制定免疫方案时应注意下面几个方面：
1．免疫剂量和间隔时间
免疫原的接种剂量应考虑抗原本身免疫原性的强弱、动物的个体状态和免疫时间。一般认为，免疫剂量适当加大，时间间隔延长，可获得高效价的抗体。但也有人认为，给动物注射小剂量抗原，有利于高亲和性抗体的产生。第一次免疫时免疫剂量宜小，避免接种过量的抗原，导致免疫麻痹，随后可增大抗原剂量。免疫的间隔时间也是重要的因素，蛋白质抗原一般间隔10～20天，半抗原免疫间隔时间较长，为40～50天。
2．免疫途径
免疫途径通常有静脉、腹腔、肌肉、皮下、皮内、淋巴结、脾内等，依不同的免疫方案而异。皮内或皮下接种时一般采用多点注射，如足掌、腋窝淋巴结周围、背部两侧。足掌接种容易感染，饲养时应注意环境的清洁。皮内接种易引起细胞免疫反应，对提高抗体的效价很有利，一般用于初次免疫。静脉或腹腔接种后抗原能很快进入血流，一般多用于颗粒性抗原的免疫和加强接种。如抗原宝贵可采用淋巴结内微量接种法。方法是先给动物注射卡介苗或完全佐剂，待淋巴结肿大后将抗原直接注入淋巴结内。这种免疫方法只需10～100μg抗原即可获得较好的免疫效果。
３．免疫方案举例
常规的免疫方案多采用颈背部多点皮内接种的方法进行初次免疫，然后定期进行加强免疫，最后在采血前再进行静脉接种加强免疫。下面列举三种常用的免疫方案供大家参考。
1） 全量免疫法 首次于家兔足掌皮下接种弗氏完全佐剂抗原l～10mg，l或2周后在皮下接种弗氏不完全佐剂抗原 l～10mg，以后每隔一周皮下多点接种
l～10mg，共4～5周，5周后试血，如合格后即可放血。
2） 微量免疫法 本法适用于难以纯化的珍贵抗原。具体方法是：在家兔两足掌皮下接种活卡介苗，每只约10mg。7～10天后，可见腘窝淋巴结肿大，用两指固定淋巴结，接种完全佐剂抗原100～200μg。1个月后再注入抗原400～600μg，8～10天试血，如合格即放血。
3） 混合免疫法 此法综合足掌皮下、淋巴结和静脉途径进行免疫，它具有抗原用量小、产生抗体效价高的优点。其方法是先于家兔双后足掌皮下接种弗氏完全佐剂抗原各0.5ml(5mg／ml)，2周后于双侧后肢肿大的腘窝淋巴结内各注入0．5ml同样抗原制剂，第3周于耳静脉采血测试效价。若效价不够高，可用不加佐剂的抗原(5mg／ml)通过耳静脉以加强免疫，l周内接种3次，分别为0．1、0．3、0．5
ml， l周后再次采血测试效价。 |
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