荧光免疫技术是以荧光素标记的特异性抗体或抗原作为试剂,用于相应抗原或抗体的分析鉴定和定量测定,包括荧光抗体染色技术和荧光免疫测定两种类型。
1.荧光抗体染色技术 荧光抗体染色技术是用荧光抗体对细胞、组织切片或其他标本中的抗原(或抗体)进行鉴定和定位检测,借助荧光显微镜检测或定位被检抗原,或是应用流式细胞仪进行自动分析检测。前者是传统的定位荧光技术,仅限于检测组织切片或细胞表面抗原或血清中的抗体,亦称荧光免疫组化技术;后者是利用流式细胞术对游离细胞进行快速计数和分类。
2.荧光免疫测定 荧光免疫测定 (fluorescence
immunoassay, FIA) 是70年代以来在荧光抗体染色技术基础上发展起来的多种定量方法,用于体液标本中抗原或抗体的检测。荧光免疫测定同酶免疫测定一样,根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游离的荧光标记物而分为均相和非均相两种类型,基本反应式如下:Ab*+Ag→Ab*Ag+
Ab*(Ab*Ag代表结合的标记物,Ab*为游离的标记物)。如在抗原抗体反应后,先把Ab*Ag与Ab*分离,然后测定Ab*Ag或Ab*中的标记物的量,从而推算出标本中的Ag量,该方法称为非均相荧光免疫测定法,时间分辨荧光免疫测定法即属此法。如在抗原抗体反应后Ab*Ag中的标记物失去荧光特性,则不需进行Ab*Ag与Ab*的分离,可以直接测定游离的Ab*量,从而推算出标本中的Ag量,该方法称为均相荧光免疫测定法,荧光偏振免疫测定即属此法。
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