荧光抗体是将荧光素与抗体以化学方式共价结合而成。FITC的异硫氰基在碱性溶液中与抗体蛋白的自由氨基形成硫碳酰胺键，使荧光素和蛋白质结合。此荧光抗体结合稳定，不影响抗体活性 ，并呈现明亮的黄绿色荧光。一个IgG分子有86个赖氨酸残基，其最大结合数为15个FITC分子。

　　常用的标记方法有搅拌法和透析法：

　　1．搅拌法 以FITC标记为例。先将待标记的蛋白质溶液用pH9.0 0.5mol/L的碳酸盐缓冲液平衡，随后在磁力搅拌下逐滴加入FITC溶液，在室温持续搅拌4～6h后，离心，上清即为标记物。此法适用于标记体积较大、蛋白含量较高的抗体。优点是标记时间短，一般仅需4～6h，荧光素用量少。但本法的影响因素多，非特异性荧光染色较强。

　　2．透析法 以FITC标记为例。先将待标记的蛋白质溶液装入透析袋中，置于含FITC的pH9.4 0.01mol/L碳酸盐缓冲液中反应过夜，以后再对PBS透析去除游离荧光素。低速离心，取上清即为标记物。此法适用于标记体积小、蛋白含量低的抗体溶液。此法标记均匀，非特异性荧光染色较弱。