1．游离荧光素的去除 方法有两种：①透析法 透析1周左右，至透析液在紫外灯下照射不发荧光为止。本法适用于蛋白质量低的标记物处理。②凝胶过滤法 常用凝胶为Sephadex G25或Sephadex G50过滤，洗脱第一峰为结合蛋白峰，第二峰为荧光素峰。该法简便快速，数小时内完成。

　　2．未标记及过度标记抗体的去除 此步骤是为了消除结合物中未标记抗体蛋白的特异性抑制作用，以及过度标记抗体蛋白所致的非特异性染色。通常采用DEAE-纤维素或DEAE-Sephadex A50离子交换层析法，梯度洗脱，分部收集洗脱液。未结合荧光素的抗体（因带阴电荷较少）最先洗脱下来，随后是荧光标记合适的抗体部分，而过量多结合荧光素的抗体（因带阴电荷较多），最后洗脱下来。

　　3．非期望抗体或交叉反应抗体的去除 可以采用组织制剂（常用正常大白鼠或小白鼠的肝粉）吸收法和固相抗原吸收法。