1．荧光素与蛋白质结合比率(F/P) 将制备的荧光抗体溶液稀释至一定浓度（A280nm约为1.0左右），分别测定A495nm值（荧光素FITC的吸收峰）和A280nm值（抗体蛋白吸收峰），然后按下列公式计算F/P比值。

　　　　　(FITC) F/P=

　　F/P比值越高，说明抗体结合的荧光素越多，反之则结合越少。一般用于固定标本的荧光抗体F/P比值以1.5左右为宜，用于活细胞染色的荧光抗体F/P比值以2.4左右为宜。

　　2．抗体效价 抗体效价取决于标记前抗体的效价和纯化程度。抗体的效价越高，标记抗体的特异性越高，非特异性荧光越少。抗体效价一般采用双相琼脂扩散试验测定，效价大于1∶16～1：32者较为理想。

　　3．抗体的特异性 常采用免疫电泳或交叉免疫电泳观察特异性沉淀线或沉淀峰来测定标记抗体的特异性，这条沉淀线或沉淀峰在紫外线照射下发出强烈荧光。

　　4．抗体的工作浓度的确定 将荧光抗体自1∶4～1∶256倍比稀释，对标本进行荧光抗体染色，以能清晰显示特异荧光且非特异性染色弱的最高稀释度为荧光抗体工作浓度。

　　5. 荧光抗体的保存 保存荧光抗体一要防止抗体失活，二是保持荧光素不脱落和不受激发淬灭。一般认为0～4℃可保存1～2年，-20℃可保存3～4年。宜小量分装，禁止反复冻融。保存前需加防腐剂（硫柳汞或叠氮钠）和除菌。真空干燥后更易长期保存。