荧光显微镜是荧光免疫组化技术的基本工具，荧光显微镜与普通显微镜的不同之处在于光源、滤光片、聚光器及镜头等。

　　1．光源 由于荧光物质的量子效率极低，要有一个很强的激发光源，通常用高压汞灯、氙灯或卤素灯做为激发光源。

　　2．滤光片 滤光片的正确选择是获得良好荧光观察效果的重要条件。滤光片分为隔热滤光片、激发滤光片和吸收滤光片。隔热滤光片安装在灯室的聚光镜前面，能阻断红外线的通过而隔热。在光源前面的一组激发滤光片，其作用是提供合适的激发光。激发滤光片有两种，其中紫外光滤片（UG）只透过波长275～400nm的紫外光，最大透光度在365nm；蓝紫外光滤片 (BG) 只透过波长325～500nm的蓝紫外光，最大透光度为410nm。靠近目镜的一组吸收滤光片的作用是滤除激发光，只允许荧光通过，透光范围为410～650nm，代号有OG（橙黄色）和GG（淡绿黄色）两种。观察FITC标志物可选用激发滤光片BG12，配以吸收滤光片OG4或GG9。观察RB200标记物时，可选用BG12与OG5配合。

　　3．聚光器 聚光器有明视野、暗视野和相差荧光聚光器等。聚光器不应吸收紫外线，它与光源、光路、激发滤光片适宜组合，以期在黑色的背景上获得满意的荧光。

　　4．镜头 镜头需无荧光。目镜有消色差、氟及复消色差三类镜头，常用的是消色差镜头。

　　5．光路 光路分为透射光和落射光两种形式。透射光的照明光线从标本下方经过聚光器会聚后透过标本进入物镜，适于观察对光可透的标本。落射光的照明光线从标本上方经过套在物镜外周的特殊的垂直照明器，从物镜周围落射到标本上，经标本反射而进入物镜，适用于观察透明度不好的标本以及各种活性组织等。与透射光联合照明，可同时观察两种荧光素的荧光，或同时观察发荧光物质在细胞内的定位。

　　6．荧光强度判定 观察标本的特异性荧光强度一般用"+"号表示。"-"为无或仅见极微弱荧光；"+"为荧光较弱但清楚可见；"++"为荧光明亮；"+++"为耀眼的强荧光。临床上根据特异性荧光强度达"++"以上判定为阳性，而对照光应呈"-"或"±"。根据呈"++"的血清最高稀释度判定特异性抗体效价。

　　7．荧光观察注意事项 荧光显微镜检查应在通风良好的暗室内进行。经荧光抗体染色的标本应在染色当天镜检，每次镜下观察时间以1～ 2h 为宜，时间过长将使高压汞灯的发光亮度下降，荧光减弱，工作人员观察过久对眼睛也有不良影响。作油镜检查时，必须用无自发荧光的镜油。