根据标记物和反应程序的不同,可将荧光免疫组化技术分类如下 :
1.直接法 用荧光素标记特异性抗体,将特异性荧光抗体直接滴加于待测标本上,直接与相应抗原反应。此法常用于细菌、病毒等病原微生物的快速检测和肾活检以及皮肤活检的免疫病理检查。本法操作简便、特异性高、非特异性荧光干扰因素少。缺点是敏感度偏低,而且每检查一种抗原需制备相应的特异性荧光抗体。
2.间接法 用荧光素标记抗球蛋白抗体(抗抗体),待基质标本中的抗原与相应抗体(第一抗体)反应,再用荧光素标记的抗抗体(第二抗体)结合第一抗体,通过荧光现象检查抗原或抗体。此法常用于检测各种自身抗体。本法的敏感性高于直接法,而且制备一种荧光抗体可用于检测多种抗原或抗体。缺点是参与的因素多,易出现非特异性荧光,试验方法较麻烦,操作时间也较长。
3.补体结合法 用荧光素标记抗补体抗体,待基质标本中的抗原与抗体反应后,加入补体,补体和抗原抗体复合物结合。再加入荧光素标记的抗补体抗体,通过荧光现象检查抗原或抗体。本法敏感度高,制备一种荧光抗体可检测多种抗原或抗体,并且适用于任何动物的抗原抗体系统。缺点是易出现非特异性荧光染色,并且每次试验都需要新鲜补体,操作复杂。
4.双标记法 用两种荧光素 (FITC和RB200) 分别标记不同抗体,对同一标本进行荧光染色,若有相应的两种抗原同时存在,可同时显示两种荧光(黄绿色和橘红色荧光)。方法与直接法相同。本法主要用于同时观察细胞表面两种抗原的分布与消长关系,区分末梢血或同一切片中T和B细胞等。
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