（一）基本原理

　　荧光偏振免疫测定（fluorescence polarization immunoassay，FPIA）是一种利用物质分子在溶液中旋转速度与分子大小呈反比的特点对荧光抗体进行检测的技术。

　　荧光偏振免疫测定技术(FPIA)是一种均相竞争荧光免疫分析法。荧光素(FITC)标记的小分子抗原和待测标本中小分子抗原与相应抗体发生竞争性结合反应，当荧光素标记的小分子抗原和相应抗体量恒定时，反应平衡时结合状态的荧光素标记小分子抗原量与待测标本中小分子抗原呈反比。经490nm激发光作用下，发射出的荧光经过偏振仪形成525～550nm的偏振光,这一偏振光的强度与荧光素受激发时分子转动的速度呈反比,游离的荧光素标记抗原,分子小,转动速度快,激发后发射的光子散向四面八方,通向偏振仪的光信号很弱；而与抗体大分子结合的荧光素标记抗原,因分子大,分子的转动慢,激发后产生的荧光比较集中,偏振光信号比未结合时强得多。因此，待测抗原越少,与抗体竞争结合的量越少,而荧光标记抗原与抗体结合量就越多,当激发光照射时,荧光偏振的程度越强因此荧光偏振信号强。根据荧光偏振程度与抗原浓度呈反比的关系，以抗原浓度为横坐标，荧光偏振强度为纵坐标，绘制竞争结合抑制标准曲线。通过测定的偏振光强度大小，从标准曲线上就可精确地换算出样品中待测抗原的相应含量。 反应系统中，待测药物和定量荧光素标记的相应药物（小分子）与定量的特异性抗体（大分子）竞争结合。当待测药物浓度高时，经过竞争反应，大部分抗体被其结合，而荧光素标记的药物多呈游离的小分子状态。由于其分子小，在液相中转动速度较快，测量到的荧光偏振程度也较低。反之，如待测药物浓度低时，大部分荧光素标记的药物与抗体结合，形成大分子的标记抗原抗体复合物，此时检测到的荧光偏振程度也较高。

　　（二）技术要点

　　有现成配套的试剂盒供应，现以环孢素(CSA)测定为例。

　　1.标本预处理:取待检全血中加入溶解剂和蛋白沉淀剂,混匀后,离心，取上清。

　　2.抗原抗体反应：在反应管中分别加入一定量的预处理标本上清、荧光素标记的环孢素、抗环孢素单克隆抗体抗体以及反应缓冲液进行抗原抗体反应。

　　3．偏振荧光强度测定：抗原抗体反应开始时立即用荧光偏振免疫检测仪测定其空白偏振荧光强度（P1），反应结束时再测定其偏振荧光强度（P2）。根据待测标本的偏振荧光强度P（P2-P1），从标准曲线上直接计算出所测物质的含量。

　　（三）方法学评价 与其他免疫学分析方法相比，FPIA具有下述优点：①均相测定简便，易于快速、自动化进行；②荧光标记试剂稳定、有效期长，并使测定的标准化结果可靠；③可用空白校正除去标本内源性荧光干扰，可获得准确结果。FPIA通常不适合大分子物质的测定，与非均相荧光免疫分析方法相比，灵敏度稍低一些。为提高FPIA灵敏度，可将相对大量标本进行预处理以去除干扰成分。如测定血清地高辛之前，血清蛋白先进行沉淀处理可使检测限达到0.2ng/ml。

　　（四）临床应用 FPIA法常用于小分子物质（特别是药物浓度）的测定。目前已有数十种药物、激素等和常规生化项目可以用FPIA进行分析：①临床治疗性药物浓度测定：环孢素、卡马西平、苯妥英钠、丙戊酸、地高辛、氨茶碱、苯巴比妥等。②毒品的检测：鸦片浓度测定等。③其他：酒精等。