1．酶的选择要求：
　　1）酶的活性要强，催化反应的转化率高、纯度高。且在抗原抗体反应的最适pH时其活性稳定。
　　2）作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分的影响，受检组织或体液中不存在与标记酶相同的内源酶或抑制物。
　　3）性质稳定，易与抗体或抗原偶联，结合后酶与抗体或抗原的活性均不受影响
　　4）判断和测量酶活性的方法简单易行、敏感、精确。
　　5）酶本身、辅助因子和底物对人体无害且价廉易得。
　　6）酶的底物易于配制、保存，稳定性强。
　　只有满足上述条件的酶才能用于酶免疫标记技术中，常用的有两种辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶，其中以辣根过氧化物酶最为常用。
　　2．辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)
HRP因在蔬菜植物辣根中含量最多而得名。它是由糖蛋白(主酶)和亚铁血红素(辅基)结合而成的复合酶，分子量约40kD，等电点为pH5.5～9.0。主酶为无色蛋白，最大吸收光谱为275nm，辅基是酶的活性中心，最大吸收光谱为403nm。
　　1) HRP的纯度用 (Reinheitzhal，RZ)表示，RZ＝A403nm/A275nm 。RZ值越大，酶的纯度越高。用于酶免疫技术的HRP，其RZ应>3.0。
　　2）HRP的活性则用活性单位表示，用邻联茴香胺法测定时，在25℃条件下lmin将l Pg底物转化为产物的酶量为一—个单位。
酶的纯度并不代表酶的活性，因此选用酶不仅要选纯度高，而且还要选活性强的酶。
　　3）HRP的优点：①分子量较小，标记物易透人细胞内；②标记方法简单；③酶及酶标记物比较稳定，易保存；④溶解性好，100m1缓冲盐溶液中可溶解5gHRP；⑤价格较低且已商品化，易得；⑥底物种类多，可供不同的实验选择。因此，HRP是目前ELISA及EIHCT中最常用的酶。氧化物、硫化物、氟化物及叠氮化物等可抑制HRP的活性，故勿用NaNs类防腐剂。
　　4)HRP的底物 为过氧化物和供氢体(DH2)。HRP的真正底物是H2O2，但人们习惯把供氢体称为底物或统称供氢体底物。在ELISA中常用的供氢体为邻苯二胺(OPD)和四甲基联苯胺(TMB)。OPD是ELISA技术中应用较多的供氢体，酶作用后显黄色（最大吸收波长为492nm），其灵敏度高，测定方便。缺点是不稳定，需新鲜配制。TMB是近年来常用的一种供氢底物经酶作用后显天蓝色，目测对比度鲜明，加酸终止酶反应后变黄色（最大吸收波长为450nm），易比色定量测定。
　　DBA是另一种供氢底物，其反应产物为不容性的棕色吩嗪衍生物，可用不同光镜观察；此种多聚物能被还原和螯合四氯化碳，形成具有电子密度的产物，便于用电镜观察。
　　

　　3．碱性磷酸酶（Alkaline phospharase, AP）
　　碱性磷酸酶是一种磷酸酯的水解酶。一般由大肠杆菌和小肠粘摸中提取，分子量为80 kD ，不易透人细胞内，故很少用于EIHCT，但因其敏感性高、空白值低，常用于EIA常用的可溶性底物为对硝基苯磷酸酯，经酶作用后为黄色，测定波长为405nm。