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酶免疫组织化学技术>> 非标记抗体酶免疫组织化学技术 |
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1．原理
该技术首先用酶免疫动物，制备效价高、特异性强的抗酶抗体（Ab3），将酶与抗酶抗体结合形成复合物，然后利用第2抗体(Ab2)作桥，Ab2既可与Ab3的Fc段结合；又可与结合在组织抗原上的第一抗体(Abl)的Fc段结合，经酶分子催化底物的显色反应，达到对抗原的检测。
2． 技术类型
1）酶桥法 用HRP免疫动物(如兔)制备抗HRP的抗体(Ab3)，经Ab2(如羊抗兔)作桥，将结合在组织抗原上的Abl(兔抗X)与Ab3连接起来，最后将HRP与Ab3结合形成Ag—Abl—Ab2—Ab3—HRP复合物，加底物显色。
2）PAP法；即过氧化物酶(P)—抗过氧化物酶(AP)法，为酶桥法的改良法，该法将抗酶抗体(Ab3)与酶制成了复合物(PAP)，直接加入该复合物，减少了操作步骤。
3）双桥PAP法 该法是PAP法的改良法，通过两次连接桥抗体和PAP，形成Ag—Abl—Ab2—Ab3—HRP—Ab2—Ab3—HRP，贝pAg—Abl—Ab2—PAP—Ab2—PAP复合物，在抗原抗体复合物上结合了比PAP法更多的酶分子，增强了方法的敏感性。技术要点与PAP法相似。
4）APAAP法 是用AP代替HRP建立的碱性磷酸酶(AP)—抗碱性磷酶酶(AAP)法，简称APAAP法。技术要点与PAP法相似。
3． 方法评价
1）用于制备抗酶抗体(Ab3)的动物应与产生或制备Abl的动物为同一种属Abl与Ab3通常来自兔对抗原和酶的抗体。Ab2为羊抗兔IgG。
2）由于酶不是标记在抗体上，而是经抗原(酶)抗体反应与抗酶抗体结合，避免了酶标抗体的缺点，提高了方法的敏感性。尤其是双桥PAP法是当今免疫组化技术中敏感性较高的方法。
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