1.原理
斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold filtration assay,DIGFA)是将抗原或抗体点加在固相载体硝酸纤维素薄膜上(这种固相载体具有过滤性能)制成抗原或抗体包被的微孔滤膜并贴置于吸水材料上,依次在膜上滴加标本、免疫金、及洗涤液等试剂并与硝纤膜上的相应抗体或抗原发生反应,过量试剂很快渗入吸水材料中。抗原抗体反应后,形成大分子胶体金复合物,从而使阳性结果在膜上呈现红色斑点。
液体通过微孔滤膜时,渗滤液中的抗原或抗体与膜上的抗体或抗原相接触,起到亲和层析的浓缩,达到快速检测的目的(一般在5分钟左右完成),同时洗涤液的渗入在短时间内即可达到彻底洗涤目的,简化了操作步骤,达到简便的目的,成为“床边检验(point
of care test,POCT)”主要方法之一。本方法除试验盒本身外,不需要任何仪器设备。
2.方法类型
1)双抗体夹心法测抗原
用抗体结合在微孔滤膜中央,滴加待检标本,若标本中待测抗原则与膜上抗体结合,然后滴加金标抗体,加洗涤液洗涤后,阳性者即在膜中央呈红色斑点(胶体金聚集)。
2)间接法测特异性抗体
用抗原包被在微孔滤膜上,滴加待测标本,滴加洗涤液洗涤后, 滴加金标抗抗体,加洗涤液洗涤后,阳性者即在膜中央呈红色斑点(胶体金聚集)。该法由于血清标本中非目的IgG的干扰,易导致假阳性结果,临床上较少用。
3.实验材料
本法临床上均有现成试剂盒供应,试剂盒主要组成有(图-1):①滴金反应板 胶体金免疫渗滤试验中主要试剂成分之一,由塑料小盒、吸水垫料和点加了抗原或抗体的醋酸纤维素膜片三部分组成。②胶体金标记物
③洗涤液 ④抗原参照品或抗体阳性对照品。
4.技术要点
1)将反应板平放于实验台面上,于小孔内滴加含待测抗原标本1-2滴,待完全渗入,与膜上的抗体反应而结合在膜上。
2)于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂1-2滴,待完全渗入,使胶体金标记抗体与结合在膜上抗原反应。
3)于小孔内滴加洗涤液2-3滴,待完全渗入,洗去未结合的胶体金标记抗体。
4)结果观察 在膜中央有清晰的淡红色或红色斑点显示者判为阳性反应,反之则为阴性反应。斑点呈色的深浅相应地提示阳性强度。
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