1．原理
　　免疫金银染色（immunogold silver staining，IGSS）是在金免疫技术基础上发展起来的更为敏感的技术。1983年，Holgate等人将IGS与银显影方法相结合创立了免疫金银法。基本原理是通过免疫反应沉积在抗原位置的胶体金颗粒起着一种催化剂作用，用对苯二酚还原剂将银离子(Ag+)还原成银原子(Ag)。被还原的银原子于是围绕金颗粒形成一个“银壳”，“银壳”一旦形成本身亦具有催化作用，从而使更多银离子还原并促使“银壳”越长越大最终使抗原位置得到清楚放大（图-5）。

　　　　　　　　　　

图-5 免疫金银染色原理示意图
　　2．技术要点
　　1）配制银染色液 在pH3.5柠檬酸缓冲液中加入明胶、对苯二酚、硝酸银配制而成。
　　2）染色
　　（1）被检血清经适当稀释后均匀滴加在细胞抗原片上，被检血清中抗体与片上抗原结合，流水冲洗后再用缓冲液冲洗，加BSA进行封闭。
　　（2）滴加适当稀释的SPA-胶体金进行反应。
　　（3）滴加新鲜配制的银染液，室温避光染色反应。
　　（4）流水冲洗、晾干、中性树胶封片后光镜下检查，银灰色颗粒沉积者为阳性。
　　3． 注意事项
　　　1） 此法具有分辨力高，定位精确的优点。
　　　2） 所带玻璃器皿应洁净，所用蒸馏水必须双蒸或三蒸。
　　　3） 配制胶体金溶液时，调整各试剂的比例可获直径不同的金颗粒。
　　　4） 直径>lOnm的金粒子不易穿透组织，故作细胞内抗原定位时，以配制直径5nm的金溶胶为宜。
　　　5） 硝酸银、对苯二酚溶液应避光保存并临用时现配。
　　　6） 被检血清中有其他自身抗体，如抗平滑肌抗体，抗心肌抗体、抗线粒体抗体等其抗原片应根据专门试验的要求制备。