1.原理
胶体金标记物与镍网上待检标本上相应蛋白质发生结合反应,由于胶体金颗粒具有高电子密度的特性,故金标蛋白结合处,电镜下可见黑褐色颗粒,而从对细胞膜或细胞内的蛋白质进行定性与定位。
2.技术要点
1)标本包理。戊二醛对标本进行固定,锇酸后固定(固定膜结构),丙酮或乙醇逐级脱水,包埋(Epon812树脂),超薄切片(80nm)置300目镍网上。
2)免疫组化染色。白蛋白封闭,加第一抗体,孵育,PBS冲洗,卵白蛋白封闭,加第二抗体(胶体金标记IgG ),孵育,PBS冲洗,蒸馏水冲洗,醋酸双氧铀、枸橼酸铅复染,电镜观察。
3.注意事项
1)以上染色步骤除清洗外,皆在滴于蜡膜(封口膜)上的各种液体小滴上进行。应注意始终保持镍网湿润,不得任何一种液体干于网上,并要吸去镊子尖部夹起的多余液体。
2)用于电镜的免疫金法可分为包埋前染色和包埋后染色两大类,包埋后染色具有简便可靠,结果重复性好,能在同一组织切片上进行多重免疫染色的优点。但本法会使某些抗原失活,细胞膜结构不易保持完整。
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