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化学发光免疫测定技术>> 技术要点 |
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1.常用的实验材料
（1）化学发光剂标记物：临床上最常用的发光剂是吖啶酯类发光剂。吖啶酯类具有显著的优点：①氧化反应不需催化剂，只要碱性环境中就可以进行。反应物在加入H2O2后再加氢化钠溶液，发光反应迅速，本底低。②在氧化反应过程中，结合物被分解，因此游离的吖啶酯的发光不受抑制。③试剂稳定性好。
（2）免疫磁颗粒：指由抗原或抗体包被的磁颗粒。
（3）反应试剂：指发光物发光时所需的氧化剂（H2O2）和PH纠正液（NaOH）。
（4）定标液和质控液。
2．双抗体夹心法其主要步骤为：
（1）抗原抗体反应：将包被单克隆抗体的磁颗粒和待测标本加入到反应管中，标本中待测抗原与磁颗粒上抗体结合，再加上吖啶酯标记抗体，经过温育，形成磁颗粒抗体-抗原-吖啶酯标记抗体复合物。
（2）游离和结合部分的分离：在电磁场中进行2-3次洗涤后，很快地将未结合的多余抗原和标记抗体洗去。
（3）化学发光反应：经过洗涤的磁性颗粒中，加入氧化剂（H2O2）和PH纠正液（NaOH），使其呈碱性，这时吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解并发光，由集光器进行接收，经光电倍增管放大作用，记录1秒钟内所产生的光子能，这部分光的积分与被测AFP含量成正比，根据标准曲线，仪器可以自动计算出其AFP含量。
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