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电化学发光免疫测定技术>> 技术要点 |
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1．常用的实验材料
1）三联吡啶钌的标记物：通过三联吡啶钌的N羟基琥珀酰胺酯（NHS）将其与抗原或抗体连接，制成三联吡啶钌标记物。
2）免疫磁珠：可将抗原或抗体直接或通过生物素-亲和素系统包被在磁珠颗粒上，制成免疫磁珠。
3）三丙胺溶液。
4）定标液和质控液。
2．双抗体夹心法检测抗原，其主要步骤为：
1）三联吡啶钌标记抗体和生物素标记抗体与待测标本同时加入一个反应杯中孵育反应。
2）将链霉亲和素包被磁珠加入反应杯中，再次孵育，使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、抗体连接为一体，形成双抗体夹心法。
3）蠕动泵将形成的 [Ru(bpy)3]2+-抗体-抗原-抗体-生物素-链霉亲和素-磁珠复合体吸入流动测量室，此时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时，游离的抗体（与生物素结合的和与[Ru(bpy)3]2+结合的抗体）也被吸出测量室。
4）蠕动泵加入含三丙胺（TPA）的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光强度，光强度与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系,故可测出待测抗原的含量。
5）最后，终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定。
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