1．HRP—亲合素结合物的制备
　　改良过碘酸钠法：
　　1） 6 mg HRP溶于1.5mL双蒸水，加入新鲜配制的0.05mol/LNaIO4 0.3 ml ，室温搅拌10min；
　　2） 加入3滴乙二醇，室温振荡5 min；
　　3） 装入透析袋，对2 mmol／L，pH 4.5—5.0醋酸盐缓冲液，于4℃透析4—6h，至少换液8次；然后用0.2 mol/L pH9．0碳酸盐缓冲液(CB)透析平衡至pH 9.0，制得HRP醛基溶液；
　　4） 搅拌下逐滴加入用0.0l mol/L，pH 9.0 CB配制的亲合素(4mg/ml)1.5ml，室温避光继续搅拌2h；
　　5） 搅拌下滴加新鲜配制的NaBH4(4mg/ml)0.15ml (600μg)，4℃搅拌下作用80min；
　　6） 装入透析袋，对0.01 lmo1／L，pH 7.2 PBS，于4℃透析过夜，其间换液8次以上。次日离心去沉淀；
　　7） 加入BSA至终浓度为3mg/ml或加50％甘油。小量分装，低温保存。
　　2．亲合素-生物素化HRP复合物(ABC)的制备
将10μg／ml的亲合素与等体积浓度为2.5μg／ml的生物素化酶(HRP-B)混合，室温下轻摇作用30min后再使用，可以明显降低背景非特异性染色。上述两种试剂均用0.1mo1/L，pH 7.6 Tris-HCl缓冲液配制。
　　3．链霉亲合素(SA)标记技术 SA的等电点较低(pI=6.0)，表面所带正电荷少，且不含任何糖基，在实验中出现的非特异性结合远低于一般亲合素。因此当今免疫学检测使用的BAS试剂大多改用SA标记的酶结合物。以HRP-SA结合物的制备为例说明制备方法。
HRP-SA结合物的制备(过碘酸钠法)：
　　（1） 取HRP 5mg溶解于0.5 ml蒸馏水，加人60mmol/L NaIO4 0.5 mL，4℃作用20min。
　　（2） 加入0.16 mol/L乙二醇0.5ml，再置4℃30min；
　　（3） 继加SA 5 mg溶解后混匀；对0.05 mo1/L， NaHCO3，缓冲液，4℃透析过夜；
　　（4） 取出透析物，加KBH4(5mg/ml) 0.3 ml，4℃作用3h；
　　（5） 加等体积的饱和硫酸铵溶液，放4℃30min后，以4000 r／min离心15 min；
　　（6） 将沉淀物溶解于0.02 mol/l，PH 7.4PBS 0.5mL中；对相同PBS于4℃透析24h箱结合物内加入等体积甘油。低温保存备用。