| ABC集中了BAB法和LAB法的优点。
1．原理：首先将亲和素与生物素－HRP按一定比例结合，形成可溶性复合物（Avidin-biotin-HRP complex,ABC）。由于酶分子能与多个生物素分子结合，而亲和素又能与4个结合位点与Biotin-HRP反应，同时酶标生物素上的多个生物素分子又可称为很多“触手”与亲和素形成晶格样连接的复合物，该复合物中未饱和的亲和素结合位点，再与第二抗体分子上的生物素结合，从而使抗原抗体反应与ABC标记体系成为一个多级放大的体系，是该方法检测的敏感度明显提高。
参见原理图
ABC反应体系中，亲和素与生物素－HRP两种试剂的比例直接关系反应的敏感性。能产生最佳效果复合物结构模式未亲和素分子的4个结合位点在尽量与生物素化酶分子中的生物素结合后，必须保留有一定量与生物素化抗体结合的位点。因此，标准化ABC试剂中亲和素：生物素化酶为1：4。
2．方法（以常规石蜡切片检测为例）
1） 常规ABC
原理：如上所述。
操作：
⑴ 石蜡切片脱腊至水，方法同BAB法。
⑵ 0.01mol/L pH 7.2 PBS洗片3min，三次。
⑶ 0.3% H2O2甲醇，作用10～20分钟。(清除内源性过氧化物酶)。
⑷ 酶消化（石蜡切片）：以0.05％胰蛋白酶（Trypsin）或9％胃蛋白酶（pepsin）消化30～120分钟。洗片。
⑸ 加入适当稀释的二抗的正常血清进行封闭，37℃作用20min。（封闭阻断作用）。⑹ 吸弃多余血清，勿洗，即刻加入第一抗体，37℃反应40min；PBS洗片。
⑺ 加入生物素化二抗，37℃反应40min；PBS洗片。
⑻ 加入ABC复合物，37℃反应40min；PBS洗片。（ABC复合物用前半小时将亲和素与生物素－HRP等量混合制备。
⑼ 加底物显色，衬染观察。
2） PAP－ABC联合应用
原理：PAP－ABC（Avidin-biotin-peroxidase-antiperoxidase）联合应用的原理是在PAP法后，连续应用ABC法，使生物素化二抗合PAP系统中的抗体Fc段结合，由于特异性第一抗体可结合更多的酶分子。所以，该法不仅可使第一抗体稀释度加大（节省第一抗体），而且可使原始信号明显放大，提高了任一单一方法的敏感性。（如图所示）。
操作：
⑴ 石蜡切片脱腊至水，方法同BAB法。
⑵ 0.01mol/L pH 7.2 PBS洗片3min，三次。
⑶ 0.3% H2O2甲醇，作用10～20分钟。(清除内源性过氧化物酶)。
⑷ 酶消化（石蜡切片）：以0.05％胰蛋白酶（Trypsin）或9％胃蛋白酶（pepsin）消化30～120分钟，洗片。
⑸ 加入适当稀释的二抗的正常血清进行封闭，37℃作用20min。（封闭阻断作用）。
⑹ 加入第一抗体，37℃作用60min或4℃过夜，洗片。
⑺ 加入第二抗体，37℃作用90min ，洗片。
⑻ 加入鼠PAP或兔PAP，37℃作用20～30min ，洗片。
⑼ 加入ABC复合物，37℃反应40min；PBS洗片。
⑽ 加底物显色，衬染观察。
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