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BAS敏感、稳定、特异性强为其优点，但检测步骤多，参与影响因素必然较多，取得清晰可信的结果，必须注意可能影响BAS反应系统的诸多因素。
1．活化生物素（N—羟基琥珀酰亚胺—生物素酯）标记抗体的效果与两者比例密切相关，一般以生物素酯与蛋白抗体重量比(W／W)以l：7或体积比(V／V)1：5为宜。
2．生物素广泛存在于哺乳动物肝、肾、乳腺及脂肪等组织，亲合素或ABC试剂中
的亲合素均可与这些内源性biotin结合出现非特异性染色或假阳性结果，然而生物素分子仅有一个可与Avidin结合位点。因此，为了阻断内源性生物素干扰作用，可先用25μg／m1的亲合素溶液与待检组织作用15min，使其占据非特异性内源生物素位点，然后PBS洗10min，再行ABC染色。
3．ABC复合物中亲合素与生物素化酶的比例及用量直接影响检测效果，一般采用亲合素：生物素为4：1为佳。
4．对涂片及离心细胞ABC染色时必须充分洗涤细胞以除去死细胞、细胞碎片及杂蛋白成分，可以Fico1l-Hypaque梯度离心处理；涂片必须干燥后再固定，否则易脱片，干燥后涂片可存4℃数周或-20℃数月备用，但以单克隆抗体对细胞膜抗原定位检测（如淋巴细胞CD抗原检测及定位）最好即刻应用；细胞涂片密度要适度，一般l06／m1较好。
5．在BAS检测中无关蛋白封闭法对阻断非特异性吸附十分必要。一般应采用与生物素化抗体同种属的正常动物血清或正常羊血清作稀释蛋白效果好。在以NC法测定细胞抗原时，应在滴加细胞前将膜全部封闭，如测定可溶抗原决定簇，可先将抗原吸附膜后，再封闭其空位。
6．亲合素等电点较高(pI＝l0.5)，易出现非特异吸附，为此可将亲合素琥珀酰化以消除或降低非特异吸附。方法：据实验用量需要，取等量亲合素与琥珀酸酐混合，4℃过夜或23℃作用1h即可。检测中以0．1mol/LpH
9．5的碳酸盐缓冲液稀释也可降低亲合素非特异吸附作用。
7．BAS试剂标准化，确定最佳实验条件及用量不仅可保证BAS的高敏感、高特异性，而且可节约第一抗体（特别是McAb）的用量。国外已生产多种BAS标准试剂盒供检测使用。
8．BAS各种试剂最好加保护剂做小量分装，低温存放，应避免反覆冻融原装试剂。
保护剂常用中性甘油、正常胎血血清或羊血清。注意不应使用无保护剂的缓冲液稀释保
存试剂，因蛋白质在低浓度下保存效果不佳。
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