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  1.原理:白细胞介素2(1L-2)为重要的淋巴因子之一,对诱导免疫活性细胞的分化成熟及调节免疫应答具有重要作用。淋巴细胞可通过膜表面相应的白细胞介素2受体(1L-2R)接受IL-2的刺激而活化。IL-2Rα为低亲和力的受体,当淋巴细胞受抗原刺激或受促有丝分裂素(如PHA)诱导后,其IL-2Rα的表达可发生明显地变化。人外周血单个核细胞(PBMC) IL-2Rα可采用生物素—链亲合素—ELISA玻片法检测,方法简单、准确。
首先,鼠抗IL-2Rα单克隆抗体(McAb)与PBMC的IL-2Rα结合,再加入生物素化羊抗鼠IgG作用,后者又可与酶(如HRP)标记的链亲合素结合,最后以底物显色反应判IL-2Rα阳性细胞。
2.方法:
1)肝素抗凝血2m1加等量Hank’s液混合后缓慢加至等体积淋巴细胞分离液上,4000,/min离心20min,常规分离PBMC,洗3次,以含10%FCS的1640培养液,制备lX
106/m1细胞悬液。
2)取20μl细胞悬液涂片,冷风吹干,丙酮固定5~10min,吹干。检测PHA诱导的PBMCIL-2R。时,可将PHA加入PBMC(PHA终浓度为100Pg/m1),置37℃、C02孵箱培养72h后制片,方法同上。
3) 以画圈油划出所涂细胞的范围,加鼠抗IL-2RαMcAb,稀释液10μl。
4) 玻片置37℃湿盒,蒸馏水冲洗后,以TBS漂洗3次,5min/次,干燥。
5) 加生物素化羊抗鼠IgG10μl。
6) 重复步骤4。
7) 加SA-HRP 10μl重复步骤4。
8) 显色:加入新鲜配制的DAB显色后,TBS漂洗。IL-2Rα阳性细胞为棕色,阴性细胞不着色。