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淋巴细胞功能检测>> B细胞功能检测 |
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1．B细胞转化试验
与T细胞转化试验相同，但刺激物主要为美洲商陆(PWM)，富含SPA的金葡菌Cowan-1株（简称SAC）、细菌脂多糖(LPS)、抗IgM抗体及EB病毒等。
2．溶血空斑形成试验
溶血空斑形成试验是检测空斑形成细胞 (plaque forming cell，PFC) 即B细胞功能的一种方法，由Jerne创建，主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响，评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。
1）经典溶血空斑形成试验
（1）原理 经典溶血空斑形成试验用于检测实验动物抗体形成细胞的功能。将SRBC免疫小鼠，与一定量SRBC混合，在补体参与下，使抗体产生细胞周围的SRBC溶解，形成肉眼可见的圆形透明的溶血空斑。每一个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。
（2）技术要点 将SRBC免疫小鼠，4 天后取脾，制备一定浓度的脾细胞悬液。然后与SRBC在琼脂糖凝胶内混合，倾注于小平皿内，使成一薄层。加入补体，孵育后，计数PFC。
（3）方法评价 本方法的稳定性和重复性较好，敏感性较高。但只能检测实验动物抗RBC抗体的产生细胞，难以检测人类的抗体产生情况，而且需要事先免疫。所测到的细胞为IgM类抗体形成细胞，其他类型的Ig由于溶血效应较低，不能用此法检测。
2）反向空斑形成试验
（1）原理 反向空斑形成试验 (reversed hemolytic plaque assay, RHPA)是异种体外检测人类Ig分泌细胞的方法。葡萄球菌蛋白A
(SPA)能与人及多种哺乳动物IgG的Fc段呈非特异性结合。抗人Ig抗体可与待检细胞产生的Ig结合形成复合物，复合物上的Fc段可与连接在SRBC上的SPA结合，同时激活补体，使SRBC溶解形成空斑。
（2）技术要点 制备SPA 致敏的SRBC(SPA-SRBC)溶液。分离PBMC或组织来源的淋巴细胞（如扁桃体、脾细胞等）。配制底层琼脂糖溶液，浇注平皿。将PBMC或淋巴细胞悬液、琼脂糖溶液和SPA-SRBC溶液混匀，浇注在底层琼脂糖上。加入抗人Ig和补体，孵育一定时间，在显微镜下计数PFC。
（3）方法评价 本法用于检测人类 IgG产生细胞，与抗体的特异性无关。如用抗IgA、IgG或IgM抗体包被SRBC，可测定相应免疫球蛋白的产生细胞。
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