目前多采用检测NK细胞活性来研究不同疾病状态下NK细胞的杀伤功能。NK细胞具有细胞介导的细胞毒作用，能直接杀伤靶细胞。体外测定NK细胞活性的方法较多，常用的有形态学法、同位素释放法和酶释放法等。测定人NK细胞活性多以K562细胞株作为靶细胞，而测定小鼠NK细胞活性常采用YAC-1细胞株作为靶细胞。
1． 51Cr释放试验法
1）原理 应用放射性同位素 51Cr标记靶细胞，当靶细胞受到NK细胞攻击，靶细胞被破坏，释放出51Cr。51Cr辐射γ射线，通过测定受损伤或死亡靶细胞释放到上清中51Cr的放射脉冲数
(cpm)，即可计算出NK细胞活性。
2）技术要点 分离PBMC或小鼠脾细胞作为效应细胞。靶细胞加入Na251Cr04孵育培养，使51Cr掺入，洗涤除去未掺入的51Cr和其他成分。在反应板上测定孔加效应细胞和靶细胞，自然释放孔只加靶细胞，不加效应细胞，最大释放孔加靶细胞和Triton
X-100。离心。效应细胞和靶细胞孵育，使效应细胞充分作用于靶细胞。用γ计数器测定上清液cpm值，计算出NK细胞活性。
NK细胞活性(%)=
3）方法评价 本法操作简便、快速、客观、敏感、可定量。缺点是自然释放率高，所需靶细胞数量多，51Cr半衰期短，试验设备要求较高，并存在放射性同位素污染。
2．乳酸脱氢酶释放法
1）原理 乳酸脱氢酶 (LDH) 是活细胞胞浆内含酶之一。正常情况下，LDH不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可释放至介质中。释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)
变成还原型辅酶Ⅰ(NADH2)。后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐 (PMS) 还原碘硝基氯化氮唑蓝 (INT) 或硝基蓝四氮唑
(NBT)，形成有色的甲月替类化合物，在570nm波长处有一高吸收峰。利用读取的A值，经过计算即可得知NK细胞杀伤靶细胞的活性。
2）技术要点 分离PBMC，将靶细胞和PBMC加入细胞培养板孔中，同时设靶细胞自然释放对照组和最大释放对照组。低速离心后孵育。取出培养物，吸取各孔上清液加入新鲜配制的LDH底物溶液，避光反应后用柠檬酸终止反应。在酶联检测仪在570nm波长下读取各孔A值，计算NK细胞活性。
NK细胞活性（%）= 
3）方法评价 该法的优点是经济、快速、简便，并可做定量测定。缺点是LDH分子较大，靶细胞膜严重破损时才能被释出，故不能较早地反映效应细胞的功能。
|
