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吞噬细胞检测术>> 巨噬细胞功能检测离 |
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1．碳粒廓清试验
2．吞噬功能检测
1）原理 巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒。通过吞噬百分率和吞噬指数反映巨噬细胞的吞噬功能。观察CRBC的消化程度，判断巨噬细胞消化功能。
2）技术要点 用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞。将人巨噬细胞与适量的CRBC悬液混合，37℃温育，涂片，染色，油镜下观察、计数，记录消化程度，计算吞噬百分率和吞噬指数，并判断巨噬细胞的消化功能。
吞噬百分率（%）= 
吞噬指数= 
消化程度：①未消化：CRBC核清晰，着色正常；②轻度消化：CRBC核模糊、核
肿胀、染色淡；③完全消化：CRBC核溶解，染色极淡。
3．巨噬细胞溶酶体酶的测定
巨噬细胞内富含溶酶体酶，如酸性磷酸酶、非特异性酯酶、溶菌酶等，测定这些酶的活性也是衡量巨噬细胞功能的指标之一。
1）酸性磷酸酶测定
(1)原理 在适当的酸性条件下，巨噬细胞内的酸性磷酸酶能水解β-甘油磷酸钠形成磷酸盐。后者与硝酸铅反应产生磷酸铅。磷酸铅再与硫化铵反应形成黑色硫化铅，沉积在细胞内酸性磷酸酶所在处，显示棕黑色颗粒。
（2）技术要点 配制底物反应液（β-甘油磷酸钠、硝酸铅等混合而成）。分离人巨噬细胞，涂片，干燥，固定，洗涤。将涂片放入底物反应液内，孵育。涂片经洗涤后，用硫化铵处理，洗涤。再用梯度酒精脱水，二甲苯透明，树胶封片，镜下观察。
酶活性强弱可根据颗粒的数量和粗细不同而分别判断。颗粒数量少且细者为“+”，颗粒多而粗者为“++”，颗粒很多且很粗者为“+++”。
（3）方法评价 本法的优点是使用普通试剂，价格便宜，一般实验室均能开展。封片后可较长时间保存，并可用电子显微镜研究观察细胞的超微结构。缺点是细胞必须固定，而且固定条件要求严格，如处理不当酶活性易消失，反应步骤也较多。
2）溶菌酶测定
(1) 原理 溶菌酶 (lysozyme，LSZ) 是一种等电点为pH 11的碱性蛋白，能与细菌牢固结合，并通过水解细菌细胞壁中的黏多肽而使其裂解。通过检查溶菌酶对敏感菌株的裂解作用测定溶菌酶活性。以琼脂平板法为例，在混有菌液的琼脂平板上打孔，加样，一定时间后形成溶菌环，通过溶菌环直径可测定溶菌酶含量。
（2）技术要点 融化琼脂，与黄色小球菌混匀，浇注在无军平皿内。打孔，加待检样品和LSZ标准品。孵育，测量溶菌环直径。制作标准曲线（用半对数坐标纸，以LSZ标准品浓度为横坐标，溶菌环直径为纵坐标绘制标准曲线，从标准曲线查出待检LSZ含量）。
（3）方法评价 琼脂平板法重复性好，易观察，不受观察时间严格限制，测定LSZ浓度范围较大，敏感性较高。参考值：血清LSZ含量1～2mg/L；尿中LSZ含量为1～3mg/L；唾液中LSZ含量为30～70mg/L。
4．巨噬细胞表面受体测定
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